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液相色譜法在中藥分析中的應(yīng)用

時(shí)間:2019-08-28作者:人氣:1086
一、真?zhèn)舞b別
對(duì)于中藥的鑒別目前使用的方法較多,每種方法都有其特點(diǎn)和操作方法,鑒別方法也有針對(duì)的中藥和范圍,在操作起來會(huì)顯得過程繁瑣。中藥指紋圖譜可以全面的反應(yīng)中藥中化學(xué)成分和特征。而到中藥的真?zhèn)挝粗獣r(shí)可以通過中藥指紋圖譜進(jìn)行鑒別和區(qū)分。
 
二、非法染色
非法染色是近年來曝光較多的中藥摻偽行為,染色中藥以次充好,不僅影響了中藥臨床療效,而且對(duì)患者健康帶來潛在危害。色素可分為天然色素和人工合成色素,部分合成色素具有致敏性和癌誘變性。因此中藥染色已嚴(yán)重影響中藥安全,需要加強(qiáng)監(jiān)管和執(zhí)法。
 
目前國家頒布的一系列藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法主要針對(duì)10 余種單味藥材采用薄層色譜法( TLC) 和高效液相法( HPLC) 檢測(cè)1 ~ 5種色素。繼國家相關(guān)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)公布后,中藥染色出現(xiàn)了新的變化,具有規(guī)避標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定色素品種、多種色素配色染色等趨勢(shì)。
 
越來越多的研究者采用薄層、高效液相色譜、液相三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜、UHPLC-QTOF 建立了中藥中多達(dá)數(shù)十種常見染色色素系列定性、定量檢測(cè)方法,依色素性質(zhì),分別采用溶劑提取、固相萃取等前處理方法,采用UPLC-QTOF等方法 進(jìn)行測(cè)定。建立的方法覆蓋色素品種多,適用于多種中藥品種,具備高通量、準(zhǔn)確等特點(diǎn),為中藥染色檢測(cè)提供了急需的參考方法。
 
三、非法添加
糖皮質(zhì)激素是由腎上腺皮質(zhì)zui中層束狀帶分泌的一種代謝調(diào)節(jié)激素,具有調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的生物合成和代謝的作用,臨床上應(yīng)用于內(nèi)分泌代謝病、感染性疾病、血液病、心血管疾病、風(fēng)濕免疫病、呼吸疾病等的治療。但不適當(dāng)?shù)氖褂每蓪?dǎo)致多種不良反應(yīng),引起代謝紊亂。一些中藥制劑中非法添加糖皮質(zhì)激素,使患者短期內(nèi)病情得到改善,但會(huì)對(duì)健康造成嚴(yán)重威脅。
 
目前,檢測(cè)藥品和保健品中糖皮質(zhì)激素的方法主要有TLC 法、HPLC 法、LC-MS /MS 法、UPLC-MS /MS 法或幾種方法的聯(lián)用,檢測(cè)的添加劑種類都在20 種左右。
 
四、過程控制
隨著中藥在國際上的廣泛應(yīng)用,其有效性、安全性和制藥工藝過程質(zhì)量穩(wěn)定性等問題引起了專家學(xué)者的廣泛關(guān)注。中藥質(zhì)量控制一直是中藥研究與生產(chǎn)的難點(diǎn)和熱點(diǎn),也是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的重要基礎(chǔ)和關(guān)鍵。中藥指紋圖譜是指中藥經(jīng)適當(dāng)處理后,采用現(xiàn)代科學(xué)分析手段,得到的能夠標(biāo)示該中藥化學(xué)特性的共有圖形( 圖像) 的圖譜。近年來,中藥指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制方面得到了廣泛應(yīng)用,成為一種能為國內(nèi)外廣泛接受的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)模式,符合中藥多數(shù)以復(fù)方和多成分給藥的特點(diǎn),能較好地評(píng)價(jià)中藥及其制藥過程的真實(shí)性、穩(wěn)定性和一致性。
 
現(xiàn)有以單一的化學(xué)成分變化來控制中藥制藥的過程,難以體現(xiàn)中藥制藥過程中化學(xué)成分的整體變化,也很難保證中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的穩(wěn)定傳遞。采用多指標(biāo)成分含量測(cè)定和色譜指紋圖譜技術(shù)的控制模式,可對(duì)中藥制藥過程進(jìn)行精確的全程控制,有效保證中藥的有效性和穩(wěn)定性,將成為中藥質(zhì)控的重要手段,具有良好的應(yīng)用前景。
 
五、質(zhì)量控制
中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不完善是阻礙中藥產(chǎn)業(yè)走向現(xiàn)代化與國際化的障礙。中藥質(zhì)量控制模式研究從zui初依靠簡(jiǎn)單的外觀性狀觀察和顯微鑒別,到具有專屬性薄層定性鑒別和內(nèi)在成分的定量檢測(cè)方向發(fā)展。
 
研究者早期將薄層色譜引入中藥鑒定,因其具有快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛使用。高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、質(zhì)譜(MS)等方法及各種方法的聯(lián)用也被廣泛應(yīng)用于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。指紋圖譜與有效成分定量測(cè)定的結(jié)合、指紋圖譜與藥效關(guān)系的研究也推動(dòng)了中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的發(fā)展。在定量指標(biāo)方面,由測(cè)定單一成分向測(cè)定多種成分發(fā)展。目前,劉昌孝院士提出了質(zhì)量標(biāo)志物的概念,為中藥質(zhì)量控制的研究提出了新要求。液相色譜法在中藥的質(zhì)量控制中已經(jīng)被廣泛使用,具有操作簡(jiǎn)單、快速、高效、高靈敏度的特點(diǎn),并且對(duì)于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子質(zhì)量大的高分子化合物以及離子型化合物尤為適合。
 
六、研究進(jìn)展
1、在線二維液相色譜技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用進(jìn)展
中藥化學(xué)成分是中藥藥效的物質(zhì)基礎(chǔ),但往往一味中藥就囊括了從極性到非極性、從小分子到大分子的多種化合物,其組成極為復(fù)雜。因此,對(duì)中藥化學(xué)成分進(jìn)行全面、快速地表征一直是中藥分析研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn),也是研究和闡明中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的先決條件。在現(xiàn)代中藥研究中,色譜技術(shù)尤其是液相色譜(LC)作為zui常用的分離、分析手段扮演著不可替代的角色。多維液相色譜的建立和運(yùn)用也為中藥物質(zhì)基礎(chǔ)表征和活性成分篩選提供了新技術(shù)。
在線二維液相色譜因峰容量高、分離效率好而受到眾多研究者的青睞。近年來,在線二維液相色譜被廣泛地應(yīng)用于多個(gè)研究領(lǐng)域中復(fù)雜樣品的分析。在線二維液相法在中藥中的應(yīng)用顯著地提高了中藥化學(xué)成分分析和識(shí)別的效率,為后續(xù)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)制和質(zhì)量評(píng)價(jià)研究奠定了良好基礎(chǔ)。
 
2、超高效液相色譜法在中藥分析中的應(yīng)用
近年來,隨著超高效液相色譜 的興起,及其與指紋圖譜技術(shù)的迅速融合, 超高效液相色譜指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。有研究對(duì)比了土茯苓藥材的UHPLC和HPLC指紋圖譜, 發(fā)現(xiàn)UHPLC在10 min 內(nèi)完成的譜峰,HPLC需要75 min才能完成, 說明UPLC的分析效率更高,可顯著縮短分析時(shí)間,減少流動(dòng)相的消耗;UHPLC可檢測(cè)更微量的樣品,進(jìn)樣量為1∶20 時(shí),色譜峰高基本一致, 說明UHPLC的色譜分離效果更好、靈敏度更高;UHPLC的洗脫條件比HPLC的變化更簡(jiǎn)單,色譜峰的漂移時(shí)間較短,在指紋圖譜軟件中色譜峰易于匹配。相關(guān)質(zhì)控技術(shù)已成功應(yīng)用于復(fù)方丹參滴丸,并被2010 年版《中國藥典》收載。
 

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